試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被超敏C反應蛋白（hs-CRP）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的超敏C反應蛋白（hs-CRP）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
試劑的準備：
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法：
1、手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2、自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟：
1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3、樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。
4、除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7。每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷：
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
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更新時間：2024-07-04
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