羥自由基清除能力測定試劑盒說明書

微量法100T/96S

注   意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

羥自由基作用于體內蛋白質、核酸、脂類等生物分子，造成細胞結構和功能受損，進而導致體內代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應用。

測定原理：

H₂O₂/ Fe²⁺ 通過Fenton反應產生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe²⁺水溶液中Fe²⁺氧化為Fe³⁺ ，導致536nm吸光度下降，樣品對536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。

自備實驗用品：

恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液：液體100 mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體12mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體12 mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體6mL×1瓶，4℃保存。

樣品的制備：

1.        組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2.        血清、果汁等液體樣品可直接測定。

3.        提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如5 mg/mL。

操作步驟：

1、   酶標儀預熱30min，調節波長至536nm。

2、   工作液配制：使用之前按照每管試劑一：試劑二：試劑三=100:50:100（µL）的比例配制，用多少配多少，混勻。

3、   在EP管中加入如下試劑

注意：空白管和對照管只需測定一次。

計算公式:

羥自由基清除率 D% =（A測-A對）÷（A空-A對）×100%

A空、A對、A測：空白管、對照管和測定管的吸光值。

注意事項:

為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。