感謝您選擇優利科（上海）生命科學有限公司提供的微生物菌種。本中心目前有標準菌種（斜面、甘油菌、穿刺菌和凍干粉四種形式）、基因工程菌種 （斜面、甘油菌和穿刺菌三種形式）、食用益生菌和工業發酵菌種，基本涵蓋了環境、工業、農業、分析、食品、藥用真菌等各類生產和科研微生物。微生物總種類達到 2000 多種，并且該數量每天正在不斷增加。

菌種簡介：

培養基名稱：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)

生長條件：LB +氨芐青霉/素，37℃（克隆菌株DH5α，2790bp）

存儲條件：2-8℃

安全等級：0

操作步驟：

1.溶解： 收到質粒干粉后，請加入 20μl 無菌水至管底，溶解質粒，室溫靜置 1min；

2.混合（吸附質粒）： 200μl 感受態細胞 + 質粒 DNA 5~10µl 混勻，冰上放置 30min；

3.熱激導入： 42℃靜置 90s；

4.收縮膜孔： 冰浴 2min；

5.修復培養： 毎管加 800µl LB 液體培養基，37 ℃培養 1h 150 r/min；

6.篩選培養： 將適當體積（100 µl）的復蘇細胞，涂布在相應抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（瓊脂面務必干燥后）， 倒置培養 12-16h，出現菌落。

7.提取： 挑取單克隆菌落至相應抗性 LB 液體培養基中，震蕩培養 12-16h，根據試驗需要提取質粒。

提供形式：質粒干粉

菌種培養注意事項：

1.微生物菌種應保存于低溫、清潔和干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；

2.菌種操作在無菌條件下進行，接種完畢應該滅菌再做丟棄處理；

3.斜面菌種和穿刺菌種保存時間通常為 3-6 個月，應根據菌種狀況及時結轉；凍干粉保存時間通常是 2-25 年；甘油菌保  存時間為 2-5 年;

4.凍干首-次活化,干粉要全部用完，不能保留。用0.2-0.5m1的培養液或者無菌水溶解,接種在1-2個平板上，因凍干菌種處于休眠狀態,請勿接種多個平板，以免因接種量不足而導致復蘇不成功。

5.如果有不明白之處，應先與我中心聯系，避免不必要的損失。

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